Відпрацьовано умови для отримання асептичних рослин деяких видів роду Gentiana L. з різних популяцій та їх вегетативного розмноження in vitro. Розроблено методику двохетапного вирощування нетрансгенної культури ізольованих коренів G. lutea, G. punctata та G. acaulis у рідкому живильному середовищі. Встановлено, що отримані культури ізольованих коренів тирличів здатні синтезувати флавоноїди, вміст яких у них перевищує аналогічні показники у калюсах кореневого походження та в коренях інтактних рослин. Зважаючи на короткий термін нарощування біомаси, високу інтенсивність росту та здатність до синтезу флавоноїдів, отримані нетрансгенні культури ізольованих коренів тирличів після детальних тестувань можуть бути використані як альтернативне джерело екологічно чистої цінної лікарської сировини. Ключові слова : види роду Gentiana L., інтактні рослини, культура ізольованих коренів, індекс росту, флавоноїди.