Підібрано оптимальні умови для проростання насіння, вегетативного та мікроклонального розмноження, а також індукції калюсоутворення з різних типів експлантатів та тривалого вирощування культури тканин тирличу хрещатого (Gentiana cruciata L.) з географічно віддалених популяцій. Встановлено, що клітинам апікальної меристеми корінців проростків медоборської популяції G. cruciata притаманна хромосомна мозаїчність. Виявлено міксоплоїдність клітинних популяцій калюсів кореневого та листкового походження від рослин обох популяцій. Встановлено, що в інтактних рослинах G. сruciata флавоноїди інтенсивно синтезуються в надземній частині і значно менше - у коренях. Виявлено, що у калюсах кореневого і стеблового походження G. сruciata (медоборська популяція) синтезується більше флавоноїдів, ніж в коренях інтактних рослин. Ключові слова : Gentiana cruciata L., креничська і медоборська популяції, інтактні рослини і культура тканин, цитогенетичний аналіз, флавоноїди.