Відпрацьовано умови отримання асептичних рослин деяких видів роду Gentiana L. з різних популяцій та їх вегетативного розмноження in vitro. Розроблено методику двохетапного отримання і вирощування нетрансгенної культури ізольованих коренів тирличів у рідкому живильному середовищі. Встановлено, що отримані культури ізольованих коренів здатні синтезувати флавоноїди і ксантони, вміст яких у них перевищує або близький до аналогічних показників у калюсах кореневого походження та в коренях дикорослих рослин. Зважаючи на короткий термін нарощування біомаси, високу інтенсивність росту та здатність до синтезу БАР, отримані нетрансгенні культури ізольованих коренів тирличів після детальних тестувань можуть бути використані як альтернативне джерело екологічно чистої цінної лікарської сировини. Ключові слова: види роду Gentiana L., дикорослі рослини, культура ізольованих коренів, індекс росту, флавоноїди, ксантони.